蛋白质免疫印迹实验是生物医疗方向的科研工作人员经常会做的实验，然而就是这样的热门的实验，也通常会因为各种各样的小问题，导致科研人员的头大。对于一些刚开始进行科研工作的初学者来说，一些细节问题，也会很大的影响实验进程，甚至产生比较严重的后果。今天就带大家来剖析一下蛋白质免疫印迹中同批次提取蛋白条带不一致的问题。 跑出的条带不一致的情况有很多，在实验的每一步都有一定的可能性，比如电泳，转膜，敷抗体，显色等等。那么逐步分析下可能存在的问题。 一、最重要的点在于上样量稳定。上样量稳定是条带跑出正常的最基础的因素，如果上样量不一致，即使后续的操作都没有问题问题，都会导致跑出的条带不如我们想象的样子。建议在操作这一步的时候，更细致一些，重新检查下上样量的情况。 二、转膜和敷抗体步骤，是wb实验中较为关键的步骤，可能是敷抗体的时候敷的不均匀。在内参稳定，即上样量稳定的情况下，建议是再认认真真，仔仔细细做几遍，很可能重复性就做出来了。 三、显影液环节。有可能是膜没有淋干净，上面残留参差不齐的T/TBS，T/TBS能稀释显影液，目的条带本来表达量就少，某一个点残留的T/TBS稍微多一点就可能导致显影效果下降，所以建议在显影液反应前，尽量将膜上的洗膜液淋掉（当然也不能让膜干了，要是实验室富裕的话，也可以多添点显影液，效果一样）。 四、操作流程的细节问题。比如拔梳子时胶错动，加入样本后渗入其他孔或漏出。另外，加入样本时不均匀也可能会产生误差。还有就是，制胶应保证均匀无气泡，玻璃板干净，这样才能保证结果一致可靠。
